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抗肝纤维化等保肝活性筛选
2018-05-10  来源:大连美仑生物技术有限公司

抗肝纤维化体内实验:建立化学损伤性动物肝纤维化模型。给予大鼠口服给药,直至造模结束。检测了大鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)的水平;取大鼠肝组织进行病理切片,通过HE染色观察大鼠肝脏病理变化,通过Sirius Red和Masson 染色观察大鼠肝脏胶原纤维的变化,并且测定与胶原合成有关的羟脯氨酸的含量;采用Real-time PCR、免疫组织化学、Western blot方法检测了肝纤维化相关因子α-SMA、TGF-β及与胶原合成和降解相关的COL- I、TIMP-1、MMP-2的表达;在分子机制的研究中,采用Western blot方法考察化合物对PI3K/Akt、MAPK信号通路相关蛋白的影响。

抗肝纤维化体外实验:采用MTT法检测不同浓度药物处理大鼠肝星状细胞T6和人肝星状细胞LX2后的细胞活力,同时也检测了相同浓度下化合物对L02(人正常肝组织细胞)活力的影响;流式细胞仪检测药物处理后细胞周期的变化,并通过Annexin-V/PI双荧光染色标记法检测T6和LX2的凋亡率;采用透射电镜观察T6和LX2的形态改变;Western blot分析了α-SMA的表达水平,cyclin-D1、Cdk-4细胞周期蛋白和凋亡相关蛋白以及Bcl-2、Bax,caspase-3,caspase-9和 PARP表达,在分子机制研究中,考察了PI3K/Akt、MAPK通路中相关信号分子变化;以不同浓度药物和抑制剂,同时干预HSC-T6和LX2两种细胞,比较药物与这两种抑制剂对上述信号途径的作用。

研究实例:

 

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